質(zhì)粒(Plasmid)是附加到細(xì)胞中的非細(xì)胞的染色體或核區(qū)DNA原有的能夠自主復(fù)制的較小的DNA分子(即細(xì)胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質(zhì)粒雖然都是環(huán)狀構(gòu)型,它存在于許多細(xì)菌以及酵母菌等生物中,乃至于植物的葉綠體和線粒體等胞器中。
把一個(gè)有用的目的DNA片段通過重組DNA技術(shù),送進(jìn)受體細(xì)胞中去進(jìn)行繁殖和表達(dá)的工具叫載體(Vector)。
細(xì)菌質(zhì)粒是重組DNA 技術(shù)中常用的載體。質(zhì)粒分子本身是含有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu)。質(zhì)粒還帶有某些遺傳信息,所以會(huì)賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。其自我復(fù)制能力及所攜帶的遺傳信息在重組DNA操作,如擴(kuò)增、篩選過程中都是極為有用的。
質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室操作而進(jìn)行人工構(gòu)建的。與天然質(zhì)粒相比,質(zhì)粒載體通常帶有一個(gè)或一個(gè)以上的選擇性標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)和一個(gè)人工合成的含有多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量盡可能減少,以便于基因工程操作。
大多質(zhì)粒載體帶有一些多用途的輔助序列,這些用途包括通過組織化學(xué)方法肉眼鑒定重組克隆、產(chǎn)生用于序列測(cè)定的單鏈DNA、體外轉(zhuǎn)錄外源DNA序列、鑒定片段的插入方向、外源基因的大量表達(dá)等。
一個(gè)理想的克隆載體大致應(yīng)有下列一些特性:
?、欧肿恿啃 ⒍嗫截?、松弛控制型;
⑵具有多種常用的限制性內(nèi)切酶的單切點(diǎn);
?、悄懿迦胼^大的外源DNA片段;
?、染哂袃蓚€(gè)以上的遺傳標(biāo)記物,便于鑒定和篩選。
?、蓪?duì)宿主細(xì)胞無害。常用的質(zhì)粒載體大小一般在1kb至10kb之間,如PBR322、PUC系列、PGEM系列、PET系列和pBluescript(簡(jiǎn)稱pBS)等。